PCR技术中，扩增引物的设计无需考虑A、引物长度B、靶序列长度C、引物二聚体形成D、引物自身杂交E、引物3′端内的已知靶序列或未知靶序列

第1题：

第2题：

PCR-SSP序列特异性引物PCR

正确答案: 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。

第3题：

什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？

正确答案: 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。

第4题：

试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。

正确答案: （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

第5题：

决定引物与模板退火温度的因素是（）。

• A、引物与模板的长度
• B、引物与模板的GC含量
• C、模板的长度和GC含量
• D、引物的长度和GC含量
• E、模板的长度与引物的GC含量

正确答案:D

第6题：

PCR的引物是（）。

• A、一段RNA序列
• B、限定了PCR产物的长度
• C、可以无限长
• D、3′端可以任意修饰
• E、3′端可以互补重叠

正确答案:B

第7题：

关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）

• A、只能在DNA片段的特定部位产生突变
• B、不需要测序确定突变结果
• C、重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
• D、大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
• E、重组PCR定点突变法操作较大引物法简单

正确答案:C

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

关于PCR的原理，以下论述错误的是（）

• A、DNA的合成是以一股DNA单链为模板
• B、在引物的存在下，DNA多聚酶沿模板以3’→5’方向延伸引物的过程
• C、PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成
• D、包括三个步骤：①DNA变性②引物与靶DNA退火③引物延伸

正确答案:B

第15题：

对于镰状细胞贫血病的突变机理可以采用的基因诊断方法不可以是（）。

• A、设计等位基因特异性引物进行PCR
• B、测序
• C、PCR与限制性核酸内切酶技术结合
• D、核酸分子杂交
• E、在突变位点两侧设计引物再电泳分析PCR产物长度变化

正确答案:E

第16题：

有关PCR引物描述错误的是（）。

• A、为一段核酸序列
• B、限定了产物的长度
• C、与反应的特异性无关
• D、不能太长
• E、引物之间不应有互补

正确答案:C

第17题：

PCR引物设计时，按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过（）。

• A、3bp
• B、5bp
• C、7bp
• D、9bp
• E、10bp

正确答案:A

第18题：

关于聚合酶链反应（PCR）引物的叙述正确的是（）

• A、引物是一条人工合成的寡核苷酸片段
• B、引物序列与模板DNA的待扩增区互补
• C、在已知序列的模板DNA待扩增区两端各有一条引物
• D、引物自身应该存在互补序列
• E、引物的3’-端可以被修饰

正确答案:C

第19题：

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：